全面！国自然研究方案中关键技术总结得如此通透

以下文章来源于青椒医学 ，作者青椒哥

巧妇难为无米之炊。工欲善其事必先利其器。

研究方案中“关键实验技术（手段）”的系统性学习和理解，将极大提升你对研究方案的把控能力和设计能力，运筹帷幄，决胜千里，以不变应万变。

例如你知道WB的实验目的是什么吗？难道只是检测表达水平？那么WB能定量计算蛋白丰度吗？如果能那为何又有ELISA这种技术？

技术之间有互补性

因此技术之间，是相互互补的，又不可替代，这需要进一步地理解和学习。

理解关键实验技术（手段）的原理特点和实验目的，和可能的实验结论，有助于研究方案的创新和优化。

青椒医学给大家进行了总结，有不足之处请在留言区留言，协助我们更正：

1.检测RNA分子在组织和细胞空间分布和表达丰度的技术：活细胞动态RNA成像技术、单分子RNA FISH原位杂交、多分子RNA Scope原位杂交技术、细胞核-细胞质分离结合qPCR、单细胞测序技术、空间转录组技术、Northern blot、dot blot等等；

2.检测蛋白分子的空间分布和表达丰度的技术：免疫荧光、免疫组化、细胞核-细胞质分离结合WB、GFP标签融合蛋白示踪技术、空间蛋白质组学等等；

3.检测DNA拷贝数、突变与否的技术：FISH原位杂交、qPCR、基因组测序等等。

4.检测某蛋白分子总的表达量（不含空间信息）：ELISA技术（定量）、western blot技术（半定量，不准确）；

5.检测某蛋白分子的分子量大小（不含空间信息）：分子筛层析法、western blot技术、双向2D电泳、质谱分析等等；

6.检测某蛋白分子的高级结构信息：蛋白结晶后冷冻电镜解析高级结构、分子对接分析等等；

7.分子表达干预技术：分子克隆操纵表达技术、病毒载体过表达或者敲减表达（shRNA、siRNA）、点突变技术、CRISPR敲除或者敲入技术、CRISPRi沉默技术、功能区分段（truncate）敲除技术、靶蛋白小分子抑制剂或者单抗抑制剂等等；

8.体内水平探索分子功能：类器官、PDX模型、裸鼠皮下成瘤、各种XXX疾病动物模型、活体成像技术等；

9.细胞功能探索：细胞增殖、细胞周期检测、细胞衰老、细胞干性、细胞分化、细胞凋亡、细胞焦亡、炎症风暴、迁移、侵袭能力，表面受体表达等等；亚细胞结构的囊泡和细胞器的分离和电镜影像学观察；

10.分子间互作实验方法：RNA、DNA、蛋白之间的互作分析技术如下图；

11.新疾病分子、通路的寻找：蛋白质组学、代谢组学、全转录组测序、生物信息学分析等等；

关键技术上，也要量力而为，一定要符合本单位的硬件技术设施定位，且不可为了新而新，写一些天马行空，脱离实际的技术手段上去，评审专家也会提出质疑。

转自：“学术查”微信公众号

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