AC. 增强型化学发光底物：在生化分析中作为下一代化学发光底物的绿色发光鲁米诺类似物

以下文章来源于分析化学方法 ，作者科研小组

全文简介

鲁米诺及其衍生物广泛用作生物成像和生化分析中的化学发光底物。鲁米诺试剂通常会发出蓝色化学发光(CL)，其波长通常在人类肉眼和大多数具有硅基电荷耦合器件(CCD)检测器的CL分析仪的最灵敏检测范围之外。因此，开发具有更长波长发射的鲁米诺类似物是有吸引力的。本文通过鲁米诺的衍生化，合成了四种新的邻苯二甲酰肼化学发光探针(GL-1/2/3/4)。最有前途的一种，5-(4-羟基-1，3-二氧异吲哚啉-2-基)-2，3-二氢酞嗪-1，4-二酮(GL-1)，在氧化时发出明亮的绿色CL，并且与其母体鲁米诺相比显示出增强的CL性能。已经使用GL-1试剂进行了血痕成像、基于辣根过氧化物酶(HRP)的免疫测定和葡萄糖/葡萄糖氧化酶反应的分析。这些结果表明GL-1是一种新的化学发光鲁米诺类似物，在实际分析应用中具有很大的潜力，在实际化学发光分析中有望取代鲁米诺。

简介

（a）Luminol的结构及其作为CL试剂的应用；（b）本工作中制备的新CL试剂的结构。

（a）GL-1/2/3/4的发光光谱与luminol比较。（b）人类肉眼和普通CCD相机的相对波长灵敏度。（c）在HRP（10 ng/mL）和H2O2（5 mM）存在的情况下，合成类似物和luminol（均在200μM）的CL动力学剖面。（d）

（a）在CL增强剂SPTZ（300 μM）和MORP（1.8 mM）的存在下，GL-1和luminol与HRP（5 ng/mL）和H2O2（2 mM）反应时的CL动力学剖面。GL-1的浓度设置为100、200、250、280和300μM，luminol的浓度设置为300μM。（b）响应曲线（0-1800 s）下的相应积分区域从a。

（a）报告的绿色发射CL化合物GL-5和新合成的绿色发射化合物GL-6的结构。（b）GL-5、GL-6和luminol的发光光谱。（c）在HRP（10 ng/mL）和H2O2（5 mM）的存在下，GL-5、GL-6和luminol在200μM时的CL动力学响应曲线。（d）

（a）在H2O2存在下使用GL-1和luminol进行血液成像；添加血液后，图像在0、15、30、120和300秒处拍摄。（b）使用GL-1/H2O2和luminol/H2O2的血腥足迹图像。稀释了几次（10-1000次）的小鼠血液被喷洒在鞋底上，使血迹带有脚印图案。

（a）显示检测TNF-α的典型ELISA的示意图。（b）在检测60 pg/mL TNF-α时，使用不同的HRP衬底（TMB、红灯衬底和ECL@GL-1）获得的光信号。

（a）使用ECL@GL-1和四种市售的ECL试剂从HepG2细胞化物中对GAPDH进行WB成像。（b）WB图像的平均信噪比。试剂盒中的HRP联继发抗体在使用前被稀释了500万次。

（a）显示使用ECL@GL-1作为检测试剂的GOx的CL分析示意图。（b）CL强度与GOx的浓度；（插入）CL强度和GOx浓度之间的线性关系。

相关成果以“A Green-Emitting Luminol Analogue as the Next-Generation Chemiluminescent Substrate in Biochemical Analysis”，发表在国际学术期刊“Ananlytical Chemistry”上。

文献链接：点击阅读原文

https://doi.org/10.1021/acs.analchem.3c00073

转自：“NANO学术”微信公众号

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