基于CRISPR-Cas12a/G-四链体/硫黄素T的博来霉素无标记荧光检测方法研究
2023/3/1 16:29:32 阅读：137 发布者：
CRISPR-Cas12a系统以其灵活的可编程性和出色的目标识别准确性为生物传感开辟了一条新的途径。近日，广东药科大学邹李团队基于博来霉素(BLM)介导的CRISPR-Cas12a失活和硫黄素T(ThT)诱导的G-四链体的形成，开发了一种新型的无标记荧光生物传感器，用于BLM的高灵敏检测。本文设计了一种含有BLM断裂位点的单链DNA(ssDNA)探针，作为Cas12a-crRNA的DNA激活剂。在没有BLM的情况下，DNA激活剂与Cas12a结合并激活，激活的CRISPR-Cas12a系统反式切割ThT诱导的G-四链形成。加入BLM后，DNA激活剂通过以Fe(Ⅱ)作为辅助因子的BLM的氧化作用，在断裂位点发生不可逆的切割事件。因此，Cas12a的反式切割活性不能被激活，G-四链-ThT复合体保持完整，导致荧光信号显著增加。由于BLM的特异性识别和Cas12a对DNA G-四链体的良好切割活性，该荧光生物传感器对人血清样品中的BLM具有很高的灵敏度和选择性，为生物医学研究中的BLM检测提供了一种很有前途的工具。
以ThT为荧光探针，本文研制了一种基于CRISPR-Cas12a的无标记荧光生物传感器，用于BLM的灵敏检测。本文第一次将靶标介导的DNA断裂与CRISPR-Cas12a反式切割G-四链结合起来检测非核酸分析物。BLM诱导的DNA激活剂断裂可抑制CRISPR-Cas12a的反式切割，形成具有较强荧光增强作用的G-四链-ThT复合体。
论文题目：Label-free and highly sensitive fluorescent detection of bleomycin based on CRISPR-Cas12a and G-quadruplex-thioflavin T
原文链接：https://doi.org/10.1016/j.snb.2023.133459
转自：“NANO学术”微信公众号
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