高品质高质量病理检测（三十三）—BrdU染色
2023/12/21 16:21:57 阅读：94 发布者：
一、染色原理
BrdU(5-溴脱氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶的衍生物，常用于标记活细胞中新合成的DNA，可代替胸腺嘧啶选择性整合到复制细胞中的新合成的DNA(细胞周期S期);随着DNA复制进入子细胞中，BrdU特异性抗体可以用于检测BrdU的渗入，从而判断细胞的增殖能力。
二、染色步骤
1.4%多聚甲醛固定10分钟；
2.用2N HCl（浓盐酸：水=1:6）在37°C孵育30 min使核酸变性，暴露BrdU结合稳点；
3.用PBS洗3次，每次5 min；
4.用含5% FBS的封闭液（Blocking buffer）常温下封闭1 h；
5.4 ℃下孵育一抗BrdU与其他合染抗体过夜；
6.常温下PBS洗3次，每次5 min；
7.常温下孵育荧光二抗（1：1000）2 h;
8.PBS洗3次，每次5 min；
9.用5 µg/mL DAPI工作液在常温下孵育5min；
10.再用PBS常温下洗3次，每次5 min；
11.抗瘁灭剂封片剂封片，37°C烘箱中稍作烘干直到盖玻片不自行滑动；
12.普通荧光显微镜或激光共聚焦显微镜采集图片。
三、案例展示
转自：“精英汇科研服务”微信公众号
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