5 个「冰冻切片」技巧，带你搞定组织切片，优化 IHC！
2023/6/1 14:23:48 阅读：107 发布者：
「进阶」
冰冻切片的 IHC 染色步骤
正式用冰冻切片做实验时，每个实验室的 protocol 可能不相同，以下步骤仅供参考：
PBS 洗 2 次，每次 5 分钟，（必要时应用 0.1% 柠檬酸钠+0.1%triton 打孔)；
3% 双氧水灭活内源性过氧化物酶，20 分钟，避光；用 PBS 洗 2 次，每次 5 分钟；
正常血清封闭：从染片缸中取出切片，擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分，滴加正常山羊或兔血清（与第二抗体同源动物血清）处理，37 ℃，15 分钟。
滴加第一抗体：用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加第一抗体，37 ℃，2 小时（也可置于 4 ℃ 冰箱过夜）；
PBS：5 分钟，2 次（置于摇床）；
滴加生物素化的二抗，37 ℃，40 分钟。PBS：5 分钟，2 次（置于摇床）；滴加三抗 （SAB 复合物） ，37 ℃，40 分钟；
PBS：5 分钟，2 次（置于摇床）；DAB 显色，镜下观察，适时终止（自来水冲终止） 。
最后，自来水（细水）充分冲洗；苏木素复染，室温，30 秒，自来水冲洗；自来水冲洗返蓝，15 分钟；梯度酒精脱水：80%，2 分钟 95%，2 分钟 100%，2 次，5 分钟；二甲苯透明：I ，II （二甲苯）各 5 分钟
封片：加拿大树胶（或中性树胶）封片。
转自：“丁香学术”微信公众号
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