Nano Lett. 等离子体交联比色PCR用于简单、高灵敏核酸检测

简单、低成本、准确的核酸检测平台在POC病原体检测、疾病监测和控制方面有着巨大的应用前景。等离子光热聚合酶链反应（PPT-PCR）是一种强大而高效的核酸扩增技术，但它缺乏一种简单而方便的分析方法用于POC应用。在此，该研究通过整合基于磁纳米粒子（PMN）的PPT-PCR和基于金纳米粒子（AuNP）的交联比色法，提出了一种新的等离子交联比色法（PPT-ccPCR）检测方法。在有扩增子的情况下，AuNPs与PMNs形成组装结构，并在磁场中收集，导致上清液的颜色变化。浓度低至5拷贝/μL的目标DNA可以在40分钟内被目测到。根据吸收信号，检测限为1.8拷贝/μL。这种简单而敏感的策略不需要昂贵的仪器，显示了POC检测的巨大潜力，同时也使临床诊断得到进一步应用。

在确定的参数下，评估拟议平台的分析性能。目标DNA的连续稀释液被置于PPT-ccPCR系统中，最终浓度从104拷贝/μL到10-1拷贝/μL。在热循环之前，将两种类型的纳米粒子-探针共轭物加入溶液中。PPT-PCR 15分钟后，样品在室温下孵育20分钟，然后进行磁性收集。PPT-ccPCR测定可在40分钟内完成。利用PCR的指数扩增能力的优势，即使在10拷贝/μL的低浓度下也能用肉眼检测到目标DNA，而且上清液几乎是无色的。在目标浓度约为5拷贝/μL时，与阴性样品相比，红色略显模糊。然而，当目标浓度降低到小于5拷贝/μL时，与阴性样品相比，没有明显的颜色变化。使用紫外-可见分光光度计，可以获得更准确的颜色对比信息。当目标DNA浓度为5拷贝/μL时，可以清楚地检测到，而低于5拷贝/μL的低浓度样品的吸光度与阴性对照相似。根据吸收信号计算出的检测限（LOD）为1.8拷贝/μL，这与传统的PCR相当。

https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.nanolett.3c00533

转自：“NANO学术”微信公众号

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