3 步！小分子量蛋白，跑出漂亮 WB

「进阶」

条带弱的其他原因

其实小分子蛋白 WB 经常失败，主要会体现在：没有条带或者条带弱，我们总结了两种结果原因盘点与建议：

01、没有条带原因盘点

抗体染色不充分：建议增加抗体浓度，延长孵育时间。

酶失活：直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。

标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低：设置阳性对照，如果阳性对照有结果，但标本没有则可能是标本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低。可考虑增加标本上样量解决靶蛋白含量低的原因。

试剂不匹配：一抗与组织种属，一抗与二抗或/和底物与酶系统之间不匹配。通过设置内参照可以验证二级检测系统的有效性。

一抗失效：选择在有效期内抗体；并选择现配现用的工作液。

HRP 抑制剂：所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠。

02、条带弱原因盘点

抗体染色不充分：增加抗体浓度，延长孵育时间。

酶活性降低：直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。

标本中靶蛋白含量太低：增加标本上样量

洗膜过度：缩短洗涤时间

HRP 抑制剂：所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠。

抗体活性降低：选择在有效期内的抗体，工作液现配现用，避免长时间放置。

封闭过度：减少封闭剂的量或缩短时间；换用不同封闭剂类型。

曝光时间过短：延长曝光时间。

HRP 抑制剂：所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠。

以上就是小分子蛋白 WB 经验分享以及排查方式，更多内容可进入丁香实验小程序进行排查。

转自：“生物学霸”微信公众号

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