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一文了解DNA提取常见问题

2023/5/23 11:02:10  阅读:76 发布者:

DNA提取,是科研实验室常用的实验步骤,提取DNA的质量直接影响后续的检测工作,今天小助手将常见的问题进行了一个总结,供大家参考。

一、A260/280比值较低?或者A260/280比值较高?

用水作为洗脱液比较偏低,或者蛋白质残留,但如果操作过程中使用了苯酚,则更可能是苯酚残留。而比较高可能是大量RNA残留,没有使用RNaseA,或RNaseA活性下降。

A260值提示的含量与电泳检测时提示的含量有可见的误差则为苯酚残留。

二、提取的细菌基因组DNA有降解,为什么?

三、提取的基因组DNA生物活性差,为什么?

提取的基因组DNA中盐分浓度过高,请严格按照说明书操作。

提取的基因组DNA中含有乙醇。离心的速度和时间应该严格遵循说明书要求进行。

四、为什么用酚与氯仿抽提DNA时,还要加少量的异戊醇?

在抽提DNA时,为了混合均匀,必须剧烈振荡容器数次,这时在混合液内易产生气泡,气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力,所以能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异戊醇为24:1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25:24:1(不必先配制,可在临用前把一份酚加一份24:1的氯仿与异戊醇即成),同时异戊醇有助于分相,使离心后的上层水相,中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。

转自:MDL科研助手”微信公众号

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