AC. 基于酶催化水凝胶渗透性变化的裸眼读出距离定量侧流分析

以下文章来源于分析化学方法 ，作者科研小组

全文简介

传统的侧向流动分析(LFA)仅限于提供定性或半定量结果，并且通常需要特殊的设备来获得定量结果。在此，我们提出了一种基于酶催化水凝胶化过程中渗透性变化的裸眼读出距离定量侧流分析方法，该方法不仅具有简单、快速、高效、低成本、定量准确的优点，而且避免了特殊设备的使用。开发的LFA方法包括硝酸纤维素(NC)膜的三个主要组成部分，其包含加载山羊抗兔(GAR)抗体的对照线(C线)和加载特异性抗体的测试线(T线)，在过氧化氢(H2O2)和辣根过氧化物酶(HRP)存在下形成水凝胶的藻酸盐-酪胺缀合物，以及仅标记在T线上捕获的靶的HRP-AuNPs-Ab探针。血红蛋白A1c (HbA1c)被选择作为一个代表性的例子来证明我们的方法的可行性。在最佳条件下，开发的LFA方法在标准样品和真实人血样品中表现出优异的性能，其中真实人血样品的结果与通过离子交换色谱获得的临床数据呈高度线性相关(R2 = 0.9929)，回收率仅为3.8%。所有结果表明，我们开发的LFA方法不仅在定量检测临床复杂样品中的HbA1c方面具有巨大的潜力，而且由于抗体的可替代性，还可以作为高效检测其他靶生物分子的通用方法。

简介

样品中HbA1c的检测测试

酶交联海藻酸-酪胺（Alg-Tyr）水凝胶形成的示意图。

海藻酸盐-酪胺共轭物的表征。（a）酪胺、海藻酸盐和Alg-Tyr共轭物的FTIR光谱。（b）海藻酸盐和所有共轭物的紫外-vis吸收光谱。（c）所有0.5 wt%共轭物与1 U/mL HRP共轭物3的凝胶时间取决于（e）HRP浓度和（f）H2O2浓度。

HRP-AuNPs-HbA1cAb的优化。(a)HRP-aun PS-hba1c ab的紫外-可见吸收光谱。(b)蛋白质修饰前后AuNPs的ζ电势。(c)优化总蛋白量(HRP和HbA1c Ab)。(d)优化HRP与HbA1c抗体的重量比。

横向流动检测条的优化。（a）吸收垫的宽度。（b）H2O2浓度。（c）凝胶时间。（d）检测时间。

血液样本中HbA1c测定的基于距离的定量性能。(a)响应不同HbA1c比率的条带照片。(b)响应于样品稀释剂中添加的HbA1c的不同比例的流动距离。(c)在HbA1c分析仪上通过LFA和离子交换色谱法计算的糖化率之间的相关性。(d)健康组和糖尿病组(健康组= 15，糖尿病组= 15)糖化率的统计学p值。

相关成果以“Naked-Eye Readout Distance Quantitative Lateral Flow Assay Based on the Permeability Changes of Enzyme-Catalyzed Hydrogelation”，发表在国际学术期刊“Ananlytical Chemistry”上。

文献链接：https://doi.org/10.1021/acs.analchem.3c00892

转自：“NANO学术”微信公众号

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