【Food Control 南昌大学李欣团队】ELISA法检测低致敏配方中α-乳清蛋白

南昌大学 牛奶过敏 α-乳清蛋白 单克隆抗体 夹心ELISA 低致敏配方

α-乳清蛋白是牛奶过敏人群的主要过敏原。南昌大学李欣团队以抗重组α-乳清蛋白单克隆抗体(rALA-mAb) 3B20为捕获抗体，以生物素化抗ALA多克隆抗体(Bio-ALA-pAb)为检测抗体，建立了生物素-链亲和素扩增夹心酶联免疫吸附法(sELISA)，用于低致敏配方中ALA蛋白的特异性定量。与以往的线性检测范围(61.04 ng/mL-62.50 μg/mL)相比，该方法的线性检测范围提高了3个数量级，定量限(LOQ)提高到1.61 ng/mL。6种ALA加标食品基质的回收率均在理想范围内。该方法的准确度和精密度分别为2.78 %和10.05 %(板内)和10.23 %(板间)，变异水平可接受。与之前的经典ELISA相比，生物素链亲和素扩增sELISA节省了更多的抗体。他们团队将所建立的方法应用于婴儿低过敏性水解配方奶粉中ALA的检测，结果与电泳法基本一致。与其他商业化试剂盒相比，基于rALA-mAb的检测方法可有效地用于深加工食品中ALA的定性和定量检测。作为一种潜在的分析工具，该方法适用于检测市场上销售的乳制品样品中未申报的ALA残留，从而有助于减少牛奶过敏的发生。

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图 2 多克隆抗体制备。

图 3 sELISA方法的建立。

综上所述，他们团队提出了一种生物素-链亲和素扩增三明治酶联免疫吸附测定法，用于低致敏配方中ALA蛋白的特异性定量。与大多数过敏原分析方法相比，该方法的线性检测范围为61.04 ng/mL-62.50 μg/mL，提高了3个数量级，定量限提高到1.59 ng/mL。与之前的经典sELISA相比，该方法节省了更多的抗体，并且无需复杂的预处理，更容易进行检测食品基质中的ALA。因此，本研究建立的sELISA方法可以作为一种潜在的分析工具，可靠地检测商品乳制品中的ALA，从而防止过敏的发生，并有助于控制和监测过敏原的存在。

论文题目：Construction of sandwich ELISA method for quantitative detection of α-lactalbumin in hypoallergenic formula based on a novel monoclonal antibody prepared by the recombinant protein.

原文链接：https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2023.109800

转自：“NANO学术”微信公众号

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