以下文章来源于Zto实验动物世界 ，作者Mr lucky yang
【写在前面】：本期推荐的是由复旦大学中山医院上海心血管病研究所心内科等团队近期发表于European Journal of Pharmacology (IF5.195）的一篇文章，揭示高良姜素通过增强自噬流量和抑制炎症减轻心肌缺血再灌注损伤。
【题目及作者信息】
Galangin alleviated myocardial ischemia-reperfusion injury by enhancing autophagic flux and inhibiting inflammation
【摘要】（阅读原文为主）
自噬与心肌缺血再灌注（I/R）密切相关。自噬抑制会加重心肌I/R损伤。很少有有效的药物靶向自噬来预防心肌I/R损伤。促进心肌I/R自噬的有效药物值得进一步研究。高良姜素（Gal）增强自噬，减轻I/R损伤。在这里，我们进行了体内和体外实验，以观察高良姜治疗后自噬的变化，并研究了高良姜对心肌I/R的心脏保护作用。
方法
左前降支冠状动脉闭塞45分钟后，通过活结释放诱导心肌I/R。手术前一天和手术后立即给小鼠腹膜内注射相同体积的生理盐水或Gal。使用超声心动图、2，3，5-三苯基氯化四氮唑染色（TTC染色）、蛋白质印迹和透射电子显微镜评估Gal的效果。体外提取原代心肌细胞和骨髓来源的巨噬细胞，以测量Gal的心脏保护作用。
结果
与生理盐水治疗组相比，Gal显著改善了心肌I/R后的心功能，并限制了梗死扩大。体内和体外研究表明，Gal治疗促进了心肌I/R期间的自噬。Gal的抗炎作用在骨髓来源的巨噬细胞中得到了验证。这些结果有力地表明，Gal治疗可以减轻心肌I/R损伤。
结论
我们的数据表明，Gal可以通过促进自噬和抑制炎症来改善心肌I/R后的左心室射血分数并缩小梗死面积。
【前言】
由于自噬在心肌I/R中的心脏保护作用，人们已经努力确定可以通过促进自噬来减轻心肌I/R损伤的有效药物。高良姜素（Gal）是一种从中草药中提取的天然黄酮类化合物，具有一系列生物财产，包括抗炎和抗氧化能力。先前的研究表明，Gal能增强自噬并抑制炎症。在最近的一项研究中，Gal减轻了异丙肾上腺素诱导的MI的纤维化。在这里，我们研究了Gal是否以自噬依赖的方式减轻了心肌I/R损伤。
【方法】
研究设计和I/R模型
雄性6-8周龄野生型C57BL/6 J小鼠购自相关公司的实验动物中心。高良姜（Gal）购自江苏某医药科技有限公司。将小鼠随机分为四组：Sham+Saline、Sham+Gal、I/R+Saline和I/R+Gal。在手术前一天和手术后立即腹膜内注射相同体积的盐水或Gal（25mg/kg）。
如前所述进行心肌I/R（Shi et al., 2021. GSDMD-mediated cardiomyocyte pyroptosis promotes myocardial I/R injury）。麻醉（2%异氟烷）后，将小鼠置于仰卧位，进行左胸切开术。暴露心脏，并使用6.0丝线结扎左前降支冠状动脉。闭塞45分钟后，通过释放活结来诱导再灌注。
所有动物实验均按照动物福利规则进行，并经\动物护理伦理委员会批准（编号：2021-034）。
【心肌缺血再灌注】
【动物造模】从野生型（C57BL/6J）、Myh6-Cre和GSDMD-CKO雄性小鼠的心室分离成年心肌细胞。将7至8周龄的雄性小鼠麻醉，并打开胸部以暴露心脏。切断降主动脉，并通过向右心室注射7ml EDTA缓冲液立即冲洗心脏。将心脏转移到含有新鲜EDTA缓冲液的60mm培养皿中。通过将EDTA缓冲液、灌注缓冲液和胶原酶缓冲液顺序注射到左心室（LV）中来实现消化。然后分离组成腔室（心房、左心室），并使用镊子轻轻地将其拉成1mm的碎片。通过温和的研磨完成细胞解离，并通过添加5mL停止缓冲液抑制酶活性。将细胞悬浮液通过100μm过滤器，并使用3种中间钙再引入缓冲液对细胞进行4轮连续的重力沉降，以逐渐将钙浓度恢复到生理水平。必要时，将心肌细胞重悬于预热的平板培养基中，并在湿润的组织培养箱（37°C，5%CO2）中以应用依赖性密度将其平板在层粘连蛋白（5μg/mL）-预涂的组织培养塑料或玻璃盖玻片上。1小时后以及此后每48小时，用新鲜的、预热的培养基替换培养基。
【心肌细胞分离】从1日龄C57BL/6或GSDMD-CKO小鼠的心室中分离原代新生小鼠心室心肌细胞（NMVC）。简单地说，将新生小鼠心室切碎并用Liberase TH（瑞士巴塞尔罗氏公司）消化。通过70µm尼龙细胞过滤器（BD Falcon，Franklin Lakes，NJ）过滤后，将收集的细胞在37°C和5%CO2的新鲜培养基（含10%胎牛血清的DMEM）中孵育1小时，以通过差异电镀将心脏成纤维细胞（CF）与心肌细胞分离，因为在此期间心肌细胞不会附着在培养瓶上。然后将细胞分别在含有10%FBS和1%青霉素和链霉素的高糖DMEM中培养。心肌细胞在培养36小时后形成融合的单层并同步收缩后用于实验。所有的心肌细胞分离程序都是由对小鼠基因型视而不见的操作员进行的。
【结果部分】
1.高良姜素治疗减轻小鼠心肌I/R损伤。
2.高良姜素通过体内P3K/AKT/mTOR途径促进自噬。
3.高良姜素通过PI3K/AKT/mTOR途径促进体外自噬。
4.高良姜素在体内外逆转阻断的自噬流量。
5.高良姜素治疗减轻体内炎症反应。
6.高良姜素通过自噬抑制骨髓基质干细胞的炎症。
7.高良姜素对心肌缺血再灌注的作用机制。
【结论与讨论】
总之，我们的研究结果表明，从中草药中提取的黄酮类化合物对治疗心肌I/R是有用的。Gal以自噬依赖的方式保留心肌I/R后受损的收缩功能并减少梗死面积。因此，Gal是一种很有前途的治疗心肌I/R损伤的方法。
转自：“如沐风科研”微信公众号
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