AC.基于发夹开关的等温转录扩增用于微小RNA的简单、灵敏检测

以下文章来源于分析化学方法 ，作者科研小组

全文简介

简单、选择性和灵敏地检测临床样品中少量miRNAs的能力是非常有价值的，但仍然是一个挑战。在这项工作中，我们通过使用精心设计的发夹开关提出了一种新的miRNA检测系统，其中T7引物、模板、靶识别序列和发光RNA适体模板被编辑并嵌入到一个单链DNA发夹结构中。起初，发夹开关保持发夹结构1，其中T7聚合酶的ds启动子被破坏，因此T7聚合酶的转录反应被抑制。在与目标结合后，发夹开关1被展开并转向发夹结构2。这个开关启动体外T7转录反应，产生大量含有RNA适体的RNA转录物。因此，转录的大量RNA适体点亮荧光团进行定量分析。与现有的基于T7聚合酶的扩增系统相比，该策略表现出几个优点，包括简单、方便、高选择性和高灵敏度。实验结果表明，我们可以实现缓冲液和复杂生物样品中miRNA的定量分析。

简介

用于无标签检测MicroRNA的发光生物传感器的方案插图

（A）生物传感器机制的方案说明。生物传感器机制的验证。（B）PAGE变性凝胶，表示存在miRNA-21的转录（GMT表示发夹探针）。（C）CSTS在不同反应成分组合下的荧光发射光谱。

其他人对转录反应的影响分析。（A）阻断的碱基数（与靶RNA的互补碱基数为22）。（B）与目标RNA的互补碱基数（阻塞的碱基数为7）。

（A）在GMT7-24的37°C以下的不同剂量下，荧光光谱对miR-29b-1-5p有反应。（B）荧光强度与miR-29b-1-5p浓度的对数值线性相关。（C）荧光光谱在格林尼治标准时间7-22的37°C下以不同的剂量对miRNA-21做出反应。（D）荧光强度对miRNA-21浓度对数值的反应。

（A，B）GMT7-24的荧光检测对不同种类的miRNA物种和序列有反应，只有一两个单碱基差异，与miR-29b-1-5p。（C，D）GMT7-22的荧光分析对不同种类的miRNA物种和序列有反应，与miRNA-21只有一两个单碱基差异。

（A）一锅检测目标miRNA。（B）不同浓度的目标miRNA的热图分析。（C）不同浓度溶解在DEPC处理的蒸馏水中的靶RNA与溶解在健康人类血清中的靶RNA之间的信噪比比较。（D）用于检测血清样本中不同浓度的miRNA的恢复实验。

相关成果以“Hairpin Switches-Based Isothermal Transcription Amplification for Simple, Sensitivity Detection of MicroRNA”，发表在国际学术期刊“Analytical Chemistry”上。

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https://doi.org/10.1021/acs.analchem.3c02051

转自：“NANO学术”微信公众号

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